上海起發為System Biosciences特約經銷商，System Biosciences,簡稱SBI，美國加州灣區新成立的生技公司，致力于*、創新生物技術之開發，以研發利于基因及蛋白質功能鑒定、研究之嶄新方法和工具為宗旨。 現階段研發重心為RNA干擾（RNAi）研究之相關工具。 System Biosciences (SBI) 致力于開發*、革新的技術，為客戶研究蛋白組學和基因組學功能提供研究工具。SBI 是專業的慢病毒產品公司，提供基于慢病毒的所有相關產品、質粒、試劑盒及相關配套試劑和慢病毒延伸產品如IPS細胞多功能性誘導試劑盒和RNAi篩選文庫。

SBI  AAV100A-1說明書            

品牌：System Biosciences

貨號：AAV100A-1 （100 mL） /AAV110A-1  （250 mL）

品名：AAVancedTM Concentration Reagent   AAVanced TM濃縮試劑

產品信息

簡化基因治療開發和其他基于AAV的應用

通過簡單的一步式方案將AAV顆粒從培養基中集中，您可以簡化您的基因治療開發和其他依賴于AAV轉導的項目。

• 易于使用，單一試劑
• 直接從培養基中分離rAAV
• 沒有細胞裂解物或離心
• 節省時間和成本效益
• 與所有血清型兼容

與傳統的AAV分離方法相比，這種分離方法勞動強度大，需要多步驟，需要進行細胞裂解，CsCl 2密度梯度超速離心和色譜分析，而SBI的AAVanced TM濃縮試劑可以在一個簡單的步驟中從培養基中分離出rAAV顆粒。只需將AAVanced Concentration Reagent加入含有AAV顆粒的培養基中，在4°C孵育過夜，然后在1,500 g下旋轉30分鐘。洗一次沉淀，再旋轉三分鐘，然后重新懸浮并分裝濃縮的病毒。分離的AAV顆粒的滴度與用傳統方法分離的AAV顆粒的滴度相似（圖1）。

圖1. AAVanced Concentration Reagent提供的AAV顆粒制劑具有與使用常規方法制備的AAV顆粒相似的滴度。用PGK-GFP表達穿梭載體包裝rAAV。rAAV顆粒從包裝細胞培養基中分離，或者通過常規方法 - 細胞裂解 - 密度梯度超速離心凍融 - 或者用AAVanced Concentration Reagent。然后將等量的rAAV加入到HEK293細胞中以測試基于GFP表達的感染性。感染后10天的GFP表達細胞的代表性圖像顯示相似水平的感染性。

怎么運行的

提供簡化的基因治療和其他AAV項目的簡化工作流程

支持數據

用AAVanced Concentration Reagent分離的rAAV顯示高滴度

Figure 2. rAAV particles isolated using AAVanced Concentration Reagent are present at high copy numbers in 293T cells. A small volume of the rAAV virus isolated using AAVanced Concentration Reagent was used to infect 3×105 293T cells in a 24-well culture dish. The cells were imaged after 72-hours and rAAV copy numbers quantitated by qPCR. The copy numbers measured for the PGK-GFP rAAV virus were quite high at 2×1013 copies/mL.

Figure 3. AAVanced Concentration Reagent works with multiple serotypes in vitro. The same rAAV shuttle vector with a PGK promoter driving GFP expression was packaged in parallel into three different AAV serotypes: AAV-2, AAV-DJ and AAV-5. After 48-hours, media was collected and rAAV particles isolated using the AAVanced Concentration Reagent. Each rAAV particle pellet was resuspended in 100 mL of sterile PBS, and then 1 mL of the rAAV suspensions were added to three different cell lines (HEK293T, HT1080 and CHO) to validate transduction efficiencies. The infected cells were imaged for GFP expression 6-days after addition of the isolated rAAV particles. All serotypes of rAAV were able to infect the three different cell types tested, demonstrating the broad compatibility of AAVanced Concentration Reagent.

Figure 4. rAAV particles isolated using AAVanced Concentration Reagent work in vivo. (Upper panels) Representative images of hippocampal and midbrain sections from 6-week old C57 mice injected with AAV virus (ITR-PGK-GFP-ITR) concentrated using AAVanced Concentration Reagent. Approximay 1.5 µl of concentrated AAV virus (AAV-2 serotype) was delivered to hippocampal and midbrain regions by stereotaxic injection. Three weeks after virus injection, the animals were perfused with paraformaldehyde, fixed, and brains specimen were sectioned to 40 micron slices before imaging. The presence of robust GFP expression demonstrates successful delivery of the rAAV vector.
(Lower panels)使用AAVanced Concentration Reagent濃縮注射了AAV-5病毒（ITR-PGK-GFP-ITR）的2月齡C57小鼠的海馬中的小鼠CA3神經元的切片的代表性圖像。通過立體定位注射將約1.5μl濃縮的rAAV-5病毒遞送至皮質區域。病毒注射后兩周，動物用多聚甲醛灌注，固定，在成像前將腦切成70微米切片。強大的GFP表達的存在表明rAAV載體的成功遞送。

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