rokazyme生產(chǎn)和銷售用于研究，診斷和工業(yè)測試目的的新型酶。該公司成立于2006年，是冰島生物技術公司Prokaria的副產(chǎn)品，該公司后來合并為非營利性國有企業(yè)Matis。Prokazyme基于二十年的地熱生物勘探，微生物基因組學和酶發(fā)現(xiàn)。Prokazyme（作為中小企業(yè)）與馬蒂斯組成了一個研究聯(lián)盟，并共同參與了由歐盟資助的一些研究項目。持續(xù)的研發(fā)和與Matis的戰(zhàn)略聯(lián)盟使Prokazyme有機會開發(fā)大量不斷增長的嗜熱細菌和病毒基因數(shù)據(jù)庫，并繼續(xù)開發(fā)新的*酶產(chǎn)品。

Rma DNA ligase from Rhodothermus marinus

來自Rhodothermus marinus的Rma DNA連接酶

熱穩(wěn)定的NAD +依賴性雙鏈DNA連接酶，寬溫度范圍為5-65°C。 

來自Rhodothermus marinus的 DNA連接酶是一種熱穩(wěn)定的NAD +依賴性雙鏈DNA連接酶，其寬溫度范圍為5-65℃。所述enzym ë催化高保真DNA連接并適合于各種應用，包括基因合成。

產(chǎn)品Dlig120 Rma DNA連接酶有500個單位和2000個單位以及10x反應緩沖液。

產(chǎn)品：Dlig120S | DNA連接酶500單位| 價格：220.00 EUR

產(chǎn)品：Dlig120L | DNA連接酶2000單位| 價格：320.00 EUR

有關詳細信息，請參閱下文或下載說明書

產(chǎn)品描述

介紹：

Rma DNA連接酶催化雙鏈DNA結構中相鄰3'-羥基和5'-磷酸末端的NAD依賴性連接。與T4 DNA連接酶相反，Rma DNA連接酶對平端DNA的片段沒有可檢測的活性。與T4 DNA連接酶不同，Rma DNA連接酶在宜溫度條件下僅顯示小的連接活性，對于4bp以及2bp的共同末端。Rma DNA連接酶對RNA靶標沒有活性。從攜帶質(zhì)粒的大腸桿菌菌株中分離和純化Rma DNA連接酶，所述質(zhì)粒具有來自冰島分離的嗜熱細菌Rhodother-mus marinus的克隆DNA連接酶基因（1,2）。Rma連接酶的半衰期在91℃下為7分鐘（2）。該酶具有廣泛的反應溫度，宜活性約為55℃。

應用：

Tsc DNA連接酶是需要高溫，高嚴格連接雙鏈DNA的應用的理想酶.Tsc DNA連接酶可用于：

• 基因合成（12）來自重疊的寡核苷酸。

儲存：
儲存和稀釋緩沖液：20 mM Tris-HCl，50 mM KCl，0.1 mM EDTA，0.1％Triton X-100（v / v），1 mM二硫蘇糖醇（DTT），50％甘油（v / v），pH 7,6（25℃）。當在-15°C至-25°C下儲存時，Rma DNA連接酶是穩(wěn)定的。

反應條件：
1×反應緩沖液（10x供應）20mM Tris-HCl，20mM KCl，10mM MgCl 2,0,1％Nonidet P40（v / v），0.5mM NAD，1mM DTT，pH 7 ，5（25°C）。

濃度和單位定義
濃度10 U /μl。一個單位的Rma DNA連接酶催化在45℃下1分鐘內(nèi)1μgBstEII消化的λDNA的50％cos位點的連接。

應用方案：活性測定： 單位定義的酶測定法是用BstII消化的λDNA的cos位點的連接。

在45°C孵育1-15分鐘。在干冰/乙醇浴中進行反應。在65℃下孵育10分鐘，然后在瓊脂糖凝膠上進行分析（未連接的cos位點熔化）

通過瓊脂糖凝膠電泳和溴化乙錠染色測定結果。

質(zhì)量控制：

質(zhì)量控制：
如下所述，測定每批Tsc DNA連接酶的活性和污染活性。

缺乏DNA核酸內(nèi)切酶：

• 將0.25μg超螺旋pBR322 DNA與增加量的Tsc DNA連接酶在25μl反應中于37℃溫育16小時。> 100U的Tsc DNA連接酶顯示pBR322 DNA的超螺旋結構沒有松弛。

• 在25μl反應中，在37℃和64℃下，用Tsc DNA連接酶加入0.25μgλ-DNA Eco RI / HindIII片段16小時。100U Tsc DNA連接酶未顯示條帶圖案的改變。

不含核酸外切酶：將增加量的Tsc DNA連接酶在含有[3H] - 標記的DNA的50μl測試緩沖液中于37℃和64℃溫育4小時。顯示無外切核酸酶活性的酶量> 100U。

缺乏Rnases：
來自Ambion的RNaseAlertTM實驗室測試試劑盒（目錄號1964）用于根據(jù)制造商的方案檢測RNase活性。在1小時后37℃孵育Tsc DNA連接酶的XU后未檢測到RNase活性。

參考文獻：

• Alfredsson GA，et al。1988. J. Gen. Microbiol。134：299-306
• Torbjarnardottir SH等人。1995.基因161：1-6
• Housby JN，et al。2000.核酸研究。28：e10。
• Housby JN，et al。2001.肛門。生物化學。302：88-94
• Sutton JR，et al。1992.轉基因研究1：228

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