QA-Bio是一家致力于提供糖基化研究工具的公司，所提供的糖基化研究產(chǎn)品涵蓋糖苷內(nèi)/外切酶，去糖基化沒(méi)，唾液酸產(chǎn)品，多糖產(chǎn)品純化試劑盒，多糖標(biāo)記試劑盒等，同時(shí)提供多糖分析服務(wù)。

qa-bio E-RPNG01說(shuō)明書(shū)

產(chǎn)品編號(hào)：E-RPNG01

內(nèi)切糖苷酶

- 內(nèi)切糖苷酶切割來(lái)自糖蛋白的完整聚糖 - 
清潔制劑中的高度穩(wěn)定的酶 - 不含甘油，NaCl或其他添加劑，如EDTA。
- 測(cè)試所有酶不存在蛋白水解或意外的糖苷活性

內(nèi)切糖苷酶是用于分析糖蛋白的廣泛使用的酶。這些酶從糖蛋白釋放完整的聚糖，而外切糖苷酶釋放單個(gè)單糖（即唾液酸，半乳糖，β-N-乙酰基葡糖胺，甘露糖等）。

PNGase F通常包含在酶組中，因?yàn)槠淝懈钔暾腘-連接聚糖具有相似的活性，盡管它實(shí)際上是酰胺酶。它在天冬酰胺氨基酸和N-連接聚糖的殼二糖核心的個(gè)β-N-乙酰葡糖胺糖（GlcNAc）之間切割。Endo F酶和Endo H在和第二GlcNAc之間切割N-連接的聚糖，留下帶電荷的殘基，其有助于增加去糖基化蛋白質(zhì)的溶解度，降低蛋白質(zhì)聚集體沉淀的可能性。PNGase F切割所有N-連接的聚糖，而Endo H和Endo F酶切除特定類(lèi)型的N-連接聚糖。

酶的這種分類(lèi)還包括O-糖苷酶，其從絲氨酸或蘇氨酸氨基酸中除去核心1O-連接的聚糖（Galβ1,3GalNAcα）。通常，O-連接的聚糖含有在分支和線性連接中與半乳糖連接的另外的單糖，需要使用外切糖苷酶如唾液酸酶和半乳糖苷酶來(lái)除去額外的糖。

重組PNGase F.

來(lái)自Elizabethkingia miricola的重組PNGase F.

產(chǎn)品編號(hào) - 酶
E-RPNG01的量 - 60μLs

E -RPNG01-20 - 20μls¹

E -RPNG01-200 - 200μls²¹ 
  包括緩沖液，變性劑和Triton- 
  X²僅含酶

PNGase F，肽N糖苷酶F，N-糖苷酶，N-聚糖酶

從含有Elizabethkingia miricola基因的克隆的大腸桿菌菌株中分離重組PNGase F. 來(lái)自天然酶（E-PNG01）的重組酶的活性或比活性沒(méi)有可檢測(cè)到的差異。

PNGase F從糖蛋白切割天冬酰胺連接的（N-連接的）寡糖。PNGase F將天冬酰胺脫氨基成天冬氨酸，使寡糖保持完整。變性使裂解率提高到100倍。大多數(shù)天然蛋白質(zhì)仍然可以*N-去糖基化，但必須增加孵育時(shí)間。PNGase F將在孵育條件下保持活性至少72小時(shí)。PNGase F不會(huì)去除植物糖蛋白上常見(jiàn)的含有α-（1,3） - 連接的核心巖藻糖的寡糖; 為此目的，使用肽N-糖苷酶A.

PNGase F源自Elizabethkingia miricola的大腸桿菌重組PNGase F基因

EC 3.5.1.52

內(nèi)容
的重組PNG酶F（0.3 U）在20mM的Tris-HCl，pH 7.5中60微升等分試樣
包括用20μL和60μL包尺寸
5倍PNG酶?F反應(yīng)緩沖液7.5 PNG酶的F - 250 mM磷酸鈉，pH 7.5中
PNG酶?F變性溶液 - 2％SDS，
1Mβ- 巰基乙醇PNGase F Triton X-100-15％溶液

比活度 > 25 U / mg

活性 5U / ml

分子量 36,000道爾頓

PNGase F 6-10的pH范圍，適合7.5

PNGase F建議用法
1.在Eppendorf管中加入高達(dá)200μg的糖蛋白。用去離子水調(diào)節(jié)至35μl終體積。
2.加入10μl5xPNGase F反應(yīng)緩沖液7.5和2.5μlPNGaseF變性溶液。在100?C加熱5分鐘。
很酷。加入2.5μlPNGaseF Triton X-100并混合。
4.向反應(yīng)中加入2.0μlPNGaseF. 在37?C孵育3小時(shí)。

特異性 PNGase F從糖蛋白切割天冬酰胺連接的（N-連接的）寡糖。PNGase F將天冬酰胺脫氨基成天冬氨酸，使寡糖保持完整。變性使裂解率提高到100倍。大多數(shù)天然蛋白質(zhì)仍然可以*N-去糖基化，但必須增加孵育時(shí)間。PNGase F將在孵育條件下保持活性至少72小時(shí)。PNGase F不會(huì)去除植物糖蛋白上常見(jiàn)的含有α-（1,3） - 連接的核心巖藻糖的寡糖; 為此目的，使用肽N-糖苷酶A.

比活度定義為在37℃，pH7.5下，在1分鐘內(nèi)催化從1微摩爾RNase B釋放N-連接寡糖所需的酶量。通過(guò)SDS-PAGE監(jiān)測(cè)切割（切割的RNase B遷移更快）。

儲(chǔ)存酶儲(chǔ)存在4?C。

PNGase F參考文獻(xiàn)
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